孙铝辉¹  刘强²

1 华中农业大学动物科学学院  2 南京农业大学动物科学学院

摘要： 本研究的目的旨在评估益康脱毒剂对T-2毒素引起的肉仔鸡生产性能下降的改善效果。选择96只体重接近，健康1日龄肉仔鸡（公鸡），随机分为4个处理组，每组4个重复，每个重复6只。对照组饲喂基础日粮，试验1组饲喂基础日粮+6mg/kg T-2毒素，试验2组饲喂基础日粮+6mg/kg T-2毒素+0.05%益康，试验3组饲喂基础日粮+0.05%益康，饲养两周。试验结果表明：粮中添加6mg/kg的T-2毒素显降低了肉鸡的生产性能（P＜0.05）、降低了肉鸡对CP、Ca及P的表观代谢率（P＜0.05），诱导了肉鸡肝脏损伤、诱导肉鸡肌胃、十二指肠、空肠及回肠组织发生病变；日粮中添加0.05%的益康脱毒剂产品可有效缓解T-2毒素对肉鸡生产性能、表观代谢率、肝脏及胃肠道的损伤；同时，日粮中单独添加益康脱毒剂产品对肉鸡生产性能无显著影响。

关键词：霉菌毒素脱毒剂益康；T-2毒素；肉仔鸡

单端孢霉烯族毒素是真菌次生代谢产物，主要由镰刀菌、木霉菌和真菌菌种产生。T-2毒素是单端孢霉烯族毒素中检测到的毒性最强的霉菌毒素。世界范围内的谷物和动物饲料中都检测到T-2毒素。以往的报告显示，约20%至70%的欧洲谷类样本，包括玉米、大麦和小麦，含有T-2毒素。T-2毒素可迅速被肠道吸收，进而严重损害动物的各种器官，尤其是肝脏和消化系统。研究表明，采食含有T-2毒素的日粮，会减少小鼠、肉鸡和猪的采食量和体重增加。此外，许多研究认为T-2毒素影响器官的相对重量、血清生化指标、抑制蛋白质合成、细胞凋亡以及免疫功能的抑制。因此，在过去的几十年中，研究有效地减少T-2毒性方法引起了人们的极大兴趣。

一般来说，有几种方法可以减少 T-2毒素的有害影响，包括物理、化学和生物方法。辐照提供强烈的能量来分解谷物中的 T-2毒素 ，强碱性溶液能抑制 T-2毒素的生物活性。此外，酶处理也可以降解 T-2毒素，破坏其12,13-环氧化物环。然而，从饲料和食物中去除 T-2毒素的方法可能不稳定且昂贵，并可能进一步影响谷物品质。物理吸附通过抑制肠粘膜对霉菌毒素的吸收而更有效和更直接地去除毒素，但缺乏有效的吸附剂来吸附 T-2毒素和脱氧雪腐镰刀菌烯醇。以往的研究报告，吸附剂含有铝硅酸盐，如膨润土，蒙脱石，沸石，在动物试验和养殖中可有效防止玉米赤霉烯酮，黄曲霉毒素 b1Afb₁) ，伏马菌素 b1(Fb₁)引起的损失。水合硅铝酸钙(hscas)是一种由天然沸石矿石制成的物质，经过粉碎、筛选和高温处理后得到净化，使结构得以增加其大小、表面积和吸附容积。益康是一种霉菌毒素吸附剂，主要含有HSCAS，其表面经表面修饰剂改性，并插入-葡聚糖。改性的HSCAS 吸附剂增加了比表面积，可以增加对霉菌毒素的吸附，避免对饲料中营养物质的吸附。本研究旨在探讨益康对T-2毒素毒性的改善作用。

1 试验材料与方法 

1.1 试验动物与饲养方式

选择96只体重相近，1日龄的健康Cobb-500公肉仔鸡随机分为4组，每组4个重复，每个重复6只。自由采食与饮水。对照组饲喂基础日粮（NRC，1994），试验1组饲喂基础日粮+6mg/kg T-2毒素，试验2组饲喂基础日粮+6mg/kg T-2毒素+0.05%益康，试验3组饲喂基础日粮+0.05%益康。受T-2毒素污染的饲粮是通过蒸汽溶液制成的。简单地说，150毫克T-2毒素溶于50毫升乙醇中，然后与500克玉米混合。混合样品随后在65℃ 的烤箱中烘干，用于制作T-2毒素污染的饲粮。每天监测肉仔鸡的死亡率，并测量采食量和体重。14d测定雏鸡总能量、粗蛋白质、钙和总磷的代谢率。实验持续两周。在实验结束时，每个试验组的8只鸡被处死，收集血液和小肠十二指肠、空肠和回肠，进行血清学和肠道组织学检查。

表1 试验日龄组成和营养成分

1.2 血液生理指标和组织学检测

血清在1000转，4℃，离心10min制备。用全自动生化分析仪(beckman synchron cx4 pro，ca，usa)测定血清中alt 和ast 的活性，以及 tp 和 alb 的浓度。取十二指肠、空肠和回肠(n= 4/组) , 用10% 福尔马林中性缓冲液固定，石蜡包埋，5μm 切片，苏木精-伊红染色，组织病理学检查。用光学显微镜检查每只雏鸡的肠组织，发现病变: 绒毛上皮细胞变性、坏死和脱落; 浆膜水肿、增厚，或两者兼有。无、轻度、中度或强烈病变的切片分别给出0、1、2和3分。

1.3 表观代谢率

测定和计算雏鸡的总能量、粗蛋白质、钙和总磷的表观代谢率。总能量分析使用绝热弹热量计标准化(ika c2000)苯甲酸。分别采用高锰酸盐滴定法990.03(aoac，2000)、比色法985.01(aoac，1990)和凯氏定氮法984.13(aoac，1990)测定钙、总磷和粗蛋白。

1.4 统计分析

单因素方差分析被用来测试日粮效应的主要影响。如果有主要影响，则进行多重平均比较的 bonferroni t 检验。数据表示为平均±SD，显著性水平设置为P＜0.05。分析是用 spssstatistics 19.0软件包进行。

  2  结果  

2.1 生长性能

生长性能结果见表2。四组间初始体重无显著性差异(P＞0.05，表2)。与对照组(group 1)相比，日粮中添加T-2组(group 2)在第1-7天、第8-14天和第1-14天的体重增长和采食量分别下降15.3%-31.8% 和12.4%-20.6%，而在第8-14天和第1-14天的采食量分别增加11.4%-15.9% (P＜0.05)。虽然日粮中添加益康 (group 3)并不能减轻T-2毒素诱导的(group 2)对第1-7体重增长和采食量的不利影响，但在第8-14天和第1-14天，添加益康(group 3)可减轻T-2毒素诱导的(group 2)对体重增长和采食量的不利影响，分别为38.6%-46.6% 和33.0%-36.0%。同时，饲料中添加益康 (group 3)可减轻 T-2毒素(group 2)引起的料肉比下降。值得注意的是，在整个试验过程中，与对照组(group 1)相比，单独添加饲料添加益康(group 4)并不影响(P＞0.05)体重增加、采食量和料肉比。值得注意的是，每种处理的生长性能变化很小，这表明在目前的研究中，每种处理的四个重复的结果是可靠的。

表2 T-2毒素和益康对肉仔鸡生长性能的影响

2.2 表观消化率

营养新陈代谢率的结果如表2所示。日粮中添加T-2毒素(group 2)对表观消化能无影响(P＞0.05) ，但粗蛋白、钙和总磷的表观代谢率分别下降了14.9%、18.0% 和16.1% (P＜0.05)。与对照组(group 1)相比，添加益康（group 3）可以显著减轻T-2毒素诱导的粗蛋白和总磷表观代谢率的变化。此外，与对照组（group 1)相比，日粮添加益康 (group 4)对总能量、粗蛋白、钙和总磷的表观代谢率没有影响(P＞0.05)。

表3 T-2毒素和益康对8-14日龄肉仔鸡表观代谢能、粗蛋白、钙和总磷的消化吸收率的影响

2.3 血清生理和组织病理学

血清生化结果见表3。试验2周后，T-2毒素(group 2)对血清谷丙转氨酶(alt)、总蛋白(tp)、白蛋白(alb)无影响，但与对照组(group 1)相比，谷草转氨酶(ast)(17.7%)升高(P＜0.05)。显著地，这种变化被日粮添加益康 (group 3)所抑制。与对照组(group 1)相比，单独日粮添加益康(group 4)不影响(P＜0.05)这些血清生化指标。此外，组织学结果表明，日粮中T-2毒素诱导肠道损伤(图1)。特别是，与对照组(group 1)相比，T-2毒素组(group 2)引起绒毛上皮细胞严重变性、坏死和脱落，肠粘膜炎性细胞增多，肠道充血，肠杯状细胞增生，浆膜水肿和增厚，多数淋巴样细胞浸润于十二指肠(图1a)、空肠(图1b)和回肠(图1c)。有趣的是日粮补充益康(group 3)可以防止 T-2毒素引起的小肠损伤(group 2)。相反，单独补充益康对肠道形态没有影响(group 4)。

表4 T-2毒素和益康对14日龄肉仔鸡血清生理的影响

  3 讨论  

研究表明，霉菌毒素脱毒剂益康能有效对抗T-2毒素对肉鸡的不良影响。雏鸡摄入T-2毒素会减少体重、采食量和饲料转化率，这与以前的研究一致。本研究进一步证明，T-2毒素诱导的肉仔鸡生长性能低下与雏鸡粗蛋白、钙和总磷代谢率下降有关。这些结果类似于先前的研究，表明镰刀菌毒素可以负面影响鸡营养物质的消化率。本研究表明，日粮补充0.05% 益康成功地减少了T-2毒素的负面影响。试验组和对照组肉鸡在这些生产性能指标上均未发现不良反应，说明添加益康对肉鸡是无毒、安全的。

小肠，包括十二指肠、空肠和回肠，是大多数营养物质消化和吸收的主要部分。本研究的病理学结果表明，T-2毒素对肉仔鸡的小肠有严重的损伤作用，这些结果与前人的研究结果一致，即T-2毒素可引起肉仔鸡的肠道损伤，从而降低营养物质的利用效率。而本研究表明，T-2毒素引起的小肠损伤可以通过补充霉菌毒素脱毒剂——益康得到缓解。此外，与对照组相比，单独添加T-2毒素可增加ast 活性。血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶的活性，血清白蛋白和总蛋白的浓度，已被描述为肝功能和损伤的有价值的参数^[。这些结果与先前的研究相似，为这些研究提供了证据，证明T-2毒素在鸡身上引起肝损伤。然而，一些其他的报告表明T-2毒素不影响这些参数在家禽，猪，仓鼠。这种差异可以归因于不同的实验条件，包括暴露剂量，持续时间和动物种类。本研究结果表明，补充霉菌毒素脱毒剂益康可以改善血清生化指标的变化。综上所述，这些结果与先前的研究结果一致，即T-2毒素引起的生长迟缓主要是由于诱导的肠道和肝脏损伤所致。但日粮中添加益康可以防止T-2毒素引起的生长不良，这与抑制肠道和肝脏损伤有关。

    HSCAS吸附剂是一种已被证明具有吸附黄曲霉毒素B1的有效饲料添加剂，而一般的HSCAS吸附剂不能有效地吸附单端孢霉烯族毒素如T-2毒素和呕吐毒素。人工改性的沸石、葡甘聚糖、蒙脱石和硅藻土可以增强对霉菌毒素的吸附和解毒作用。为此，研制了一种改性HSCAS吸附剂产品——益康，以防止T-2毒素的毒性作用。以天然膨润土为基础，表面修饰剂改性，再与酵母葡聚糖进行插层。改性剂取代特殊的膨润土层间阳离子和水分子后，颗粒间距明显增大，颗粒表面由亲水性变为疏水性。因此，改性 HSCAS吸附剂具有较大的吸附容量和亲脂疏水性，能有效地吸附饲料中的各种霉菌毒素。结果表明，改性HSCAS 吸附剂能有效防止T-2毒素对肉鸡的不良影响。以往的研究表明，0.25%的吸附剂或2%的聚合葡甘聚糖可以减轻1.0-2.0 mg/kg T-2毒素的毒害作用。在日粮中添加0.05% 益康可以减轻6.0 mg/kg T-2毒素的负面影响，说明改性HSCAS吸附剂是非常有效的。同时，与前人的研究一致，改性HSCAS吸附剂——益康在当前的研究中并不影响营养物质的代谢速率和生长性能。